槐米中芦丁的提取、提纯和鉴定
一、实验目的
1．掌握芦丁提取和提纯的基本原理和方法。
2．掌握重结晶及过滤等基本操作。
3．学习芦丁及槲（hū）皮素的鉴定方法。
二、实验原理
芦丁（Rutin）亦称芸香苷，广泛存在于植物组织中，其中以槐花米和荞麦叶含量较高，槐米中含量高达12~16％，是提取芦丁的最佳原料。芦丁有减少毛细血管通透性的作用，临床上用作毛细血管止血药和高血压病的辅助治疗药物。近年来，芦丁及槲皮素作为抗癌药物的研究，取得了大量成果。芦丁属黄酮苷，其结构如下：
芦丁为淡黄色针状结晶，含有三分子结晶水（C27H36O16· 3 H2O）， 熔点为177～178 ℃，无水物熔点为190~192 ℃，难溶于冷水，微溶于冷乙醇，可溶于热水和热乙醇中。此外，还难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚及石油醚等溶剂。易溶于碱性溶液中呈黄色，酸化后又析出。本实验利用芦丁在冷热水和冷热乙醇中溶解度的差异进行提取与精制。
芦丁在不同溶剂中的溶液度：
芦丁的紫外吸收波长（CH3OH溶液）：λmax = 259mm，266nm sh，299nm sh，359nm。
槲皮素（Quercetin）是芦丁水解得到的黄酮苷元，是芦丁药用功能的主要部分，大多数黄酮类物质都具有较高的药用价值。
槲皮素为黄色结晶，含两分子结晶水（C15H10O7·2 H2O），熔点313~314 ℃，无水物熔点为316 ℃。可溶于甲醇、乙酸、吡啶、丙酮、乙酸乙酯等溶剂，不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚。在沸腾的无水乙醇中溶解度为4.4 ，在室温下乙醇中的溶解度为0.35 。可利用槲皮素在冷热乙醇中的溶解度差进行提纯。槲皮素的结构式如下：
槲皮素的紫外吸收波长（CH 3OH溶液）： λ max = 259nm，266nm，299nm ，359nm。
三、实验步骤
（一）芦丁的提取
取15 g槐米研成粉状，置烧杯中，加水300 mL，煮沸30分钟（注意适量加水，补充蒸发损失），趁热过滤，滤渣再提取两次（每次用水250 mL，煮沸15分钟），过滤，合并滤液，放置24小时，使沉淀完全析出。过滤，粗产物用少量水洗涤，得芦丁粗品，烘干，称重，计算提取率。
（二）芦丁的精制
将芦丁粗品研细，倒入圆底烧瓶中，加入100 mL 95％ 乙醇，加热回流至芦丁完全溶解，再加少量活性炭回流10分钟，然后趁热过滤于另一圆底烧瓶中，得黄色澄清溶液。蒸馏滤液并回收乙醇，待溶液剩10～15 mL时停止加热，将浓缩液倒入小烧杯中，用少量乙醇洗涤烧瓶，将洗涤液合并于小烧杯中，放置使结晶完全析出。过滤（滤液回收），得芦丁精品，烘干，称重，计算产率，测其熔点。
（三）芦丁水解制取槲皮素
取芦丁精品1.0 g 于烧杯中，研细，加30％乙醇水溶液150 mL，再加浓盐酸4 mL，加热煮沸30分钟（注意观察）。放置冷却，过滤，水洗至滤液呈中性，烘干，称重，计算产率。测其熔点（如质量不合格，可用75％乙醇重结晶），计算产率。
（四）性质试验
取芦丁及槲皮素精品少许，用95％乙醇溶解，作为样品溶液，进行下列试验，并比较两者试验结果的差异。
1．Molish反应
取两试样各l mL，各加入10％α?萘酚溶液10滴，充分摇匀，将试管倾斜，沿管壁慢慢加入1 mL浓硫酸，勿摇，观察溶液界面的颜色变化。
2．盐酸锌粉（镁粉）反应
取两试样各10滴，分别加锌粉少许，滴加浓盐酸，观察颜色变化（在白瓷板上进行）。
3．FeCl3反应
取两试样各10滴，分别加入1％FeCl3 溶液1～2滴，观察颜色变化（在白瓷板上）。
4．A1C13反应
取两试样各10滴，分别加入1％AlCl3 乙醇溶液1～2滴，观察颜色变化并检查荧光反应（在白瓷板上）。
（五）芦丁及槲皮素的紫外光谱测定
取精制样品10 mg，溶于10 mL光谱纯甲醇中，进行紫外光谱分析，扫描波长为200～400 nm，将扫描所得谱图及最大吸收峰数据与标准数据对照。
（六）芦丁及槲皮素的红外光谱测定
取精制样品约l mg，用KBr压片法进行红外光谱分析，将所得谱图与标准谱图对照，并解释光谱图中的主要特征峰。
（七）芦丁及槲皮素的液相色谱测定
HPLC法测定芦丁的含量时，常用的流动相系统为甲醇－冰醋酸溶液，比例一般为：
①美国WATERS 600E 系统；流动相为甲醇－水－冰乙酸（40：57.5：2.5）；色谱柱为μBondapak C18柱（10μm ，3.90mm×300mm）；柱温为室温；检测波长为254nm。
②Waters高效液相色谱；流动相为甲醇－水－冰乙酸（45：53：2）；色谱柱为luna 5μ C18柱；检测波长为355nm；柱温为30℃。
五、思考题
1．重结晶的主要步骤是什么？每步的目的是什么？操作中应注意哪些问题？
2．如何确定重结晶溶剂的用量？
3．写出实验（一）、（二）、（三）中所需仪器的名称和规格。
4．本实验中，重结晶所用仪器是否需要干燥？为什么？
5．如何选择产品和仪器的干燥方法？
6．芦丁水解时，盐酸的作用是什么？乙醇的作用是什么？
7．为什么芦丁提取时用水作溶剂，而重结晶时用乙醇作溶剂？
8．述固液萃取的影响因素。
第二篇：槐米中芦丁提取工艺研究
临床医学
ＣＨＩＮＡ
２Ｑ！！型Ｑ：！！
ＦｏＲＥＩＧＮ＾ＪＥＯＩＣＡＬＴ开ＥＡＴＭＥＮＴ
槐米中芦丁提取工艺研究①
童婧郭晓蓉房文亮
（安徽医科大学临床医学院
合肥
夏云２３０６０１）
【摘要ｌ目的
优选出槐米中芦丁提取的最佳工艺。方法比较从槐未中提取芦丁的３种不同的实验方法。并对碱提酸沉法工艺进行
改进。结果研究表明碱提酸沉法提取纯度最高。并且当提取碱液的ｐＨ＝９，酸析出的ｐＨ＝４时，提取率大大提高。结论通过不同提取方法的实验对比，得出了碱提酸沉法是最佳提取方法，并且为了使在产品纯度最大化的基础上提高原料利用率，实验得到提取的最佳邮条件，为大规模工业化生产提供了有价值的数据。
芦丁
Ｒ２８４．１
【关键词】槐束Ｉ中图分类号ｌ
提取
ｌ文献标识码ｌ
Ａ
Ｉ文章编号ｌ１６７４一０７４２（２０“）０９（ｂ）一００４ｌ?０２
槐米为豆科植物槐树（ｓｏｐｈｏｒａｊａｐ帆ｉｃａＬ）的花蕾，具有清热、凉血、止血的功效。现代药学研究表明，槐米中主要含有芦丁，槲皮素和粘液质等，其中芦丁是有效成分。芦丁（Ｒｕｔｉｎ），又名芸香甙（Ｒｕｔｉｏｓｉｄｅ），属黄酮类化合物【ｌ】’其化学名称为：５，７，３，４Ｌ四羟基一３一芸香糖黄酮，性状为黄色结晶粉末或无晶形粉末，有苦味，略溶于水，能溶于热水及乙醇。芦丁具有维生素Ｐ样作用，能降低毛细血管通透性和脆性，促进细胞增生和防止血细胞凝聚，临床上用于治疗毛细管脆性引起的出血症，有助于恢复毛细血管弹
１．２仪器
紫外分光光度计ＧｅｎｅｓｙＳｌｏｌ电子分析天平‘Ｒ一２０１型旋转蒸发仪ＩＸ一４型数字显示显微熔点仪－ＫＱ一５００Ｄ型数控超声波清洗器Ｉ索氏提取器；恒温水浴锅等。２方法
目前的提取方法主要有醇提法、热水提取法、碱提酸沉法，现将这３种方法加以比较。
２．１
醇提法
实验证明，８０％乙醇是最佳浓度【”，故选用８０％乙醇ｌＯＯｍＬ提取
性，如治疗脑血管出血、高血压、视网膜出血、急性出血性肾炎等；
芦丁还具有抗心肌缺氧，缺血、抗心律失常、降低血清胆固醇、抑制血小板集聚、抗溃疡、抗肿瘤、抗炎、抗过敏、抗衰老、抗辐射、抗病毒和增强免疫力等功能，是预防和治疗糖尿病、心绞痛、慢性心功能不全、高血脂和预防动脉硬化【２Ｊ、心机梗死、脑血栓等疾病的天然绿色药物。因此，目前芦丁已被广泛用于医药、保健食品和化妆品中，具有很高的开发价值。我国芦丁生产主要以槐米（槐花的花蕾）为原料进行提取。１材料与仪器１．１药材与试剂
槐米粗粉；芦丁对照品；氧化钙（ＡＲ）ｌ盐酸（ＡＲ）ｌ硼砂（ＬＲ）；亚硫酸钠（ＬＲ），ＯＰ?ｌＯ。
表１
３种不同提取方法的提取率及产品纯度对比（％）
槐米中主要成分芦丁，称取槐米粗粉１０９，加入８０％乙醇，在室温下封口浸泡４～６ｈ，加入１５ｍＬ８％的ＮａＨＣＯ，溶液，调节ｐＨ值至中性，在超声波中震荡３０ｍｉｎ后，在恒温水浴下浸泡１２ｈ，趁热抽滤，将滤液进行减压蒸馏，趁热将滤液倒入锥形瓶中，用９％的盐酸调节ｐＨ值在３～４之间，静置过夜，自然冷却析晶，即为芦丁粗品，将粗品置于２５０ｍＬ的烧杯中，加入１５０ｍＬ的蒸馏水．边加热边搅拌，再加入５ｍＬ３％硼砂溶液，用饱和石灰水调节ｐＨ值在８?９之间，煮沸至粗品溶解后，趁热减压抽滤，将滤液用９％的盐酸调节ｐＨ值在３～４之间，静置过夜，析出晶体。
２．２
热水提法
水提最佳工艺如下【“，称取槐米粗粉１００９，加２５００ｍＬ蒸馏水，
用煎煮法提取，提取３次，每次时间４０ｍｉｎ，棉花过滤，滤液常温下放置析晶１２ｈ，得芦丁粗品，将芦丁粗品按ｌ：２００加蒸馏水煮沸至完全溶解，稍放冷后抽滤、冷却、析晶、抽滤后，沉淀物于６０℃干燥８ｈ，移至干燥器中，放置ｌｈ，得芦丁精品。
表２碱溶ｐＨ值对结果的影响２．３碱提取酸沉淀法
本实验称取槐米１００９，加水８００ｍＬ煮沸，用硼砂缓冲液饱和的石灰水调ｐＨ至８～９，加入１％亚硫酸钠作为抗氧剂，在９０。Ｃ提取３０ｍｉｎ，过滤。反复提取３次，滤液合并放冷，用盐酸调ｐＨ至２～３，
表３酸沉ＰＨ值对结果的影响
３，Ｏ４．０５．０
１７７～１８６１８２～１８６１８３～１８６
６０～７０。Ｃ保持１０Ⅱ血，加入０．２５％的ＯＰ?１０，沉淀６０ｍｉｎ，过滤，结
晶用盐酸洗涤１次，用冷水洗涤２～３次得芦丁，７０。Ｃ真空干燥至恒重。为了提高芦丁的提取效率，在原实验方案的基础上，采用依次改变碱溶ｐＨ和酸沉ｐＨ的方法进行实验，其中提取实验每次用槐
１４．６棕黄
１８．１１３．２
淡黄
淡黄
①基金项目：安徽医科大学教学研究重点项目（ＮｏＪＹｘＭ２０１０２２）。
ｃＨＩＮＡＦＯＲＥＩＧＮＭＥＤＩｃＡＬ
ＴＲＥＡＴＭＥＮＴ
中夕ｈ医疗４１
万方数据
临床医学
米粗粉１０９，每次实验平行２次，取平均值报告实验结果。采用单
提取率较水提法降低。为了在保证提取纯度最大化的基础上提高提取率，我们在碱提酸沉原实验方法的基础上进行改进，结果如下（表２、３）。
结果表明，碱溶ｐＨ对芦丁提取率的影响显著，在ｐＨ＝７时，随着ｐＨ的增大，产率升高，至ｐＨ＝９时，产量最高，但随着ｐＨ的继续增加，产率下降。故采用ｐＨ＝９为最佳值。在此条件的基础上，对酸沉的ｐＨ加以改进，结果表明酸沉ｐＨ＝４时，提取率最高。４结语
通过以槐米中提取得到的粗品得率为考察指标，对槐米中芦丁的提取工艺加以改进，得到槐米中芦丁的最佳提取工艺为：药材为粗粉，８倍体积的溶剂，用硼砂缓冲液饱和的石灰水调ｐＨ＝９，加入１％亚硫酸钠作为抗氧剂，提取３０ｍｉｎ，提取３次，用盐酸调ｐＨ＝４，此时提取效果最好。本实验的提取率为１８．１％，并且污染少，成本低，操作简单，值得在大规模工业化生产中推广。参考文献
【ｌ】国家药典委员‘会．中国药典【ｓ１．北京：化学工业出版社，２００５；
７８９．
次一单因子法探讨碱溶ｐＨ和酸沉ｐＨ对芦丁提取率的影响。
２．４
纯度测定‘
精密称取０．０６２５９的芦丁对照品，加５０ｍＬ７５％乙醇溶解，定容
至２５０ｍＬ刻度线，摇匀，作为芦丁对照品溶液，精密量取对照品溶液各２．０、４．０、６．０、８．Ｏ、１０．０ｍＬ于５０ｍＬ容量瓶中，分别加蒸馏水至１０ｍＬ。另取双蒸水作为空白对照。再向上述６份溶液中分别加入５％ＮａＮＯ，溶液２ｍＬ，摇匀，静置６ｍｉｎ。分别加１％Ａｌｃｌ，溶液６ｍＬ，摇匀静置６ｍｉｎ，加４％Ｎａ０Ｈ溶液２０ｍＬ，摇匀静置１５ｍｉｎ，最后加蒸馏水至刻度，在５１０ｎｍ的波长处测定其吸光度，以芦丁对照
品的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，得出回归方程，Ｙ＝０．００９Ｘ?
Ｏ．００１８，Ｒ２＝Ｏ．９９９８。称取上述取得的３个样品各约３０ｍｇ，分别置５０ｍＬ容量瓶中，加入１０ｍＬ７５％乙醇使其溶解加水至刻度。再分别精密量取２ｍＬ供试品，依次加入上述试剂使其显色，在５ｌｏｎｍ下测定吸光度并计算芦丁的含量。３结果与讨论
采用上述３种不同提取方法分别实验提取率及产品纯度，结果见表ｌ。
【２】李茂星，谢景文，葛欣．芦丁的药效学研究进展【Ｊ】．华西药学杂
志，２０ｌｌ，１５（６）：４５０．
【３】董晓宁，赵强，王俊峰．槐花中芦丁的正交提取工艺及抗氧化
活性研究【Ｊ】．畜牧与饲料科学，２０ｌＯ，３ｌ（２）：ｌ
１一１３．
由表１可见，若以乙醇为溶剂，不仅提取率和产品纯度较低，而
且生产成本最高；热水提取法最便宜，最安全，并且所得的芦丁提取率较高，但加热时间过长，会有一定的水解产物产生，故纯度不高；由于芦丁与芸香酶共存于槐米中，在洗涤、提取过程中易受芸香酶作用而发生水解，并且芦丁具有４个酚羟基而显弱酸性。用碱性较强的溶媒提取时邻位的２个酚羟基易被氧化，并且吡喃酮环会开裂。而在酸性较强的水溶液中它易生成铴盐发生溶解，遇强酸则水解生成槲皮素和芸香糖，故纯度对药效的影响至关重要，碱提酸沉法是利用芦丁在碱水中成盐而增大溶解能力，加酸酸化后可析出结晶的原理进行的，提取纯度较水提法有明显提高，但
【４】廖华卫，邓金梅，宋粉云．正交法优化槐米中芦丁的提取工艺【Ｊ】．
广东药学院学报，２００６。２２（３）；２７５～２７６．
Ｉ收稿日期】２０１１?０８?１０
（上接４０页）
女的身心健康。对妇女的生活影响较大［３“】。念珠性阴道炎的８０％～９０％病原体为白假丝酵母菌。假丝酵母菌对热的抵抗力不强，加热致６０℃１ｈ即死亡｝但对干燥、日光、紫外线及化学制剂抵抗力较强。当人体抵抗力下降时，假丝母菌大量繁殖并转变为菌丝相，从而引起念珠性阴道炎【２１。
克霉唑属于咪唑类药物，其抑制假丝母菌的重要成分是麦角甾醇，在高浓度时呈现强大的杀菌作用。本观察中，局部用该药配合碘伏溶液冲洗阴道，取得了良好的效果。碘伏又名聚维酮碘溶液，为广谱杀菌消毒剂，它对细菌、念珠菌、病毒、支原体、衣原体均有杀灭作用，可用于皮肤消毒，粘膜冲洗，使用浓度一般为Ｏ．０２５％～Ｏ．１％【副。用于念珠性阴道炎患者的阴道冲洗治疗，能使真菌细胞臂蛋白构型改变，造成膜通透性增加，继而破坏细胞内结构，造成真菌细胞的最终死亡。联合克霉唑检使用达到双重效果，２种药物共同作用使念珠菌很快被消灭，本资料显
霉唑达栓的对照组好，与对照组（治愈率６４％）相比差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。治疗过程没有发现有不良反应，是一种安全、经济、有效的治疗方法，值得推广。参考文献
【１】王惠平．生殖器念珠菌病的诊治【Ｊ】．中国临床医生，２０１１，３９
（２）：１１．
【２】乐杰．妇产科学【Ｍ】．第７版．北京：人民卫生出版，２０ｌＯ：２３９?
２４０．
【３】贾忠伟，吕晓玲，董振香．定君生【Ｊ】．中国新药杂志，２００５，１４
（１２）：１４８９．
【４】金力，王友芬．念珠菌外阴阴道炎的诊断与治疗【Ｊ】．中国临床
医学，２００２，３０（６）：５．
【５】何月光．全科医生用药指南【Ｍ】．北京：北京科学技术出版社，
２０１０：１０５１．
示：２种药联合使用，治愈率达到９０％，治疗效果比单纯局部用克【收稿日期】２０１１?０８?１１
４２
中罗ｈ医疗ｃＨＩＮＡ
ＦＯＲＥｌ０Ｎ
ＭＥＤＩｃＡＬＴＲＥＡＴＭＥＮＴ
万方数据
槐米中芦丁提取工艺研究
作者：
作者单位：
刊名：
英文刊名：
年，卷(期)：童婧， 郭晓蓉， 房文亮， 夏云安徽医科大学临床医学院,合肥,230601中外医疗CHINA FOREIGN MEDICAL TREATMENT2011,30(26)
参考文献(4条)
1.廖华卫;邓金梅;宋粉云 正交法优化槐米中芦丁的提取工艺 2006(03)
2.董晓宁;赵强;王俊峰 槐花中芦丁的正交提取工艺及抗氧化活性研究 2010(02)
3.李茂星;谢景文;葛欣 芦丁的药效学研究进展 2011(06)
4.国家药典委员会 中国药典 2005
本文链接：http://d..cn/Periodical_hgzy201126031.aspx